转化生长因子-β1 shRNA表达载体的构建与鉴定

• 作者: 吴淳 周赟 张彪 潘展腾 王守立 胡欣 董亮 郭凌川 钟良君
• 来源期刊: 苏州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 转化生长因子-β1 表达载体 构建
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 975-977,1001,后插2
• 分类号: R730.3
• 语种: 中文

摘要

目的 构建转化生长因子(TGF)-β1短发卡RNA(shRNA)表达载体,为肿瘤生物学研究奠定方法基础.方法 根据TGF-β1的mRNA序列,运用Ambion公司的Target Finder软件筛选TGF-β1shRNA的候选点,在BglⅡ和HindⅢ位点克隆到表达载体pSUPER gfp-neo上.重组的shRNA pSUPER gfp-neo在大肠杆菌DHSa上筛选和鉴定.分别用酶联免疫吸附法(ELISA)测定和免疫荧光筛选最佳TGF-β1shRNA靶点序列.结果 ELISA和免疫荧光染色结果显示,shRNA-a、shRNA-b和shRNA-c均在不同程度上降低了靶细胞TGF-β1蛋白质表达,以shRNA-b所引起的下降最为显著(P＜0.05).结论 构建的TGF-β1shRNA在肿瘤细胞中产生较好的TGF-β1沉默效果,为肿瘤生物学研究提供了一种方法.