Asia 1型FMDV复合多表位亚单位疫苗在毕赤酵母中的表达及其免疫原性

• 作者: 叶明 朱战波 李昌 李洋 李霄 杜寿文 王婧 田明尧 胡博 袭莹 金宁一 金扩世 韩佳丽 鲁会军
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 口蹄疫病毒 多表位疫苗 毕赤酵母 免疫原性
• 年，卷（期）: 2010,（11）
• 页码范围: 1217-1221,1225
• 分类号: Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 构建以霍乱毒素B亚单位(Cholera'toxin B subunit,CT8)为分子佐剂的Asia 1型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)复合多表位亚单位疫苗,在毕赤酵母中进行表达,并评价其免疫原性.方法 构建毕赤酵母表达质粒pPIC9K-P1/2A-CTB-Tepi,转化至毕赤酵母GS115中,甲醇诱导表达,表达产物经硫酸铵沉淀法纯化后,进行SDS-PAGE和Westem blot分析.将纯化的P1/2A-CTB-Tepi蛋白和FMD灭活疫苗分别免疫BALB/c小鼠,以注射PBS作为对照,分别于0、21 d各免疫1次.每周尾静脉采血.分离血清,ELISA法检测血清抗体水平;第2次免疫后10 d.处死小鼠,分离脾脏淋巴细胞,进行淋巴细胞增殖试验和IFNγ/ELISPOT检测.结果 目的蛋白在毕赤酵母中经诱导表达后可分泌到培养上清中,在相对分子质量约为82 600(P1/2A)和40 500(CTB-Tepi)处可见2条特异性蛋白表达条带,占上清液中可溶蛋白的21%.纯化后的目的蛋白P1/2A和CTB-Tepi的比例约为1:2,且具有良好的反应原性.P1/2A-CTB-Tepi蛋白免疫小鼠产生了较强的体液免疫和细胞免疫反应,其特异性血清抗体水平与灭活疫苗组差异无统计学意义(P>0.05),而淋巴细胞增殖水平和IFN-γ分泌水平显著高于灭活疫苗组(P<0.01).结论 构建了以CTB为分子佐剂的Asia 1型FMDV复合多表位亚单位疫苗,其免疫原性良好,为FMD多表位疫苗和亚单位疫苗的研究奠定了基础.