绵羊IFN-γ和IL-2基因SYBR Green Ⅰreal-time PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 宋德光 张冰冰 王改丽 王栋 臧德跃 贺文琦 赵魁 陈克研 高丰
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 羔羊 Th1型细胞因子 荧光定量聚合酶链反应 检测方法
• 年，卷（期）: 2010,（11）
• 页码范围: 1146-1150
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.1
• 语种: 中文

摘要

为探讨传染性脓疱病毒感染后机体的细胞免疫应答,从分子水平对传染性脓疱病毒的免疫机制进行了深入探讨.首先针对Th1型细胞因子IFN-γ、IL-2以及管家基因GAPDH的mRNA序列分别设计了1对特异性引物,扩增相应的基因片段并构建含有相应基因序列的重组质粒,以所构建的重组质粒作为阳性标准品,建立了用于IFN-γ、IL-2及GAPDH检测的SYBR Green Ⅰ real-time PCR方法.该方法线性关系良好,IFN-γ、IL-2和GAPDH标准曲线的相关系数均达0.99以上;敏感性高,初始模板的检出下限均达1×103 copies/μL;特异性强,扩增产物形成单一的特异性融解峰;重复性好,组内与组间的变异系数均小于3%.应用该方法对传染性脓疱病毒感染羔羊外周血白细胞中的IFN-γ、IL-2 mRNA的表达水平进行了检测.结果表明,建立的real-time PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好等优点,可用于绵羊Th1型细胞因子的检测及定量分析.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王栋		25	103	5.0	9.0
2	赵魁		33	77	5.0	7.0
3	贺文琦		70	253	8.0	12.0
4	宋德光		41	118	6.0	9.0
5	高丰		88	276	9.0	12.0
6	陈克研		16	47	4.0	6.0
7	张冰冰		4	8	1.0	2.0
8	臧德跃		4	8	1.0	2.0
9	王改丽		5	11	1.0	3.0