枳SPL9和SPL13全长cDNA克隆、亚细胞定位和表达分析

• 作者: 宋长年 张晓莹 房经贵 王化坤 章镇 邱学林 钱剑林
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 枳 SPL9和SPL13 亚细胞定位 荧光定量RT-PCR
• 年，卷（期）: 2010,（10）
• 所属期刊栏目: 园艺
• 页码范围: 2105-2114
• 分类号: S6
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.10.017

摘要

[目的]从枳[Poncirus trifoliata(L.)Raf.]中克隆SBP类[SQUAMOSA(SQUA)promoter-binding-like]转录因子基因SPL9和SPL13全长,构建SPL9和SPL13亚细胞定位表达载体验证其是否具有核定位功能,利用荧光定量PCR研究其在枳不同组织的表达特性,初步确定SPL9和SPL13在枳生长发育过程中的作用.[方法]利用生物信息学结合RACE技术以枳花器官的cDNA为模板,克隆出SPL9和SPL13基因全长,分别命名尸Pt-SPL9和Pt-SPL13,大小分别是1519 bp和1824 bp,在GenBank的登录号分别是FJ502237和FJ502238;构建Pt-SPL9和 Pt-SPL13亚细胞定位载体35S-GW-FJ502237/FJ502238-GFP,基因枪转化洋葱表皮细胞,暗培养24 h后激光共聚焦显微镜下观察;利用SYBR Green I实时定量RT-PCR方法检测Pt-SPL9和Pt-SPL13在根、茎、叶、花序、花和果等不同组织中的表达.[结果]生物信息学分析表明,Pt-SPL9和Pt-SPL13的cDNA序列中都有microRNA156的识别位点,Pt-SPL9与金鱼草、拟南芥和玉米SPL9的同源性分别为48.9%,42.5%和41.7%;Pt-SPL13与拟南芥SPL13、水稻的SPL16和玉米的TGAl同源性分别为40.8%、38.1%和35.8%.Pt-SPL9和Pt-SPL13与其它植物的SBP一样有着高度保守的序列,即SBP结构域和一个双向核定位信号KRXXXRRRK.亚细胞定位结果表明,Pt-SPL9和Pt-SPL13均定位于细胞核中.SYBR Green I实时定量RT-PCR结果表明,Pt-SPL9和Pt-SPL13在各个器官均有表达,但表达量不同,Pt-SPL9 在茎中的表达量最高,在花和叶中的表达量次之,在根、花芽和幼果中的表达量最低;Pt-SPL13在幼果中的表达量最高,在茎和花芽中的表达量相当,其次为叶,在花和根中的表达量很低.[结论]转录因子Pt-SPL9和Pt-SPL13均具有核定位功能,Pt-SPL9和Pt-SPL13对枳的茎和果实的发育可能有着重要作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	章镇	南京农业大学园艺学院	286	5756	35.0	58.0
2	房经贵	南京农业大学园艺学院	194	3087	29.0	47.0
3	宋长年	南京农业大学园艺学院	40	502	16.0	21.0
4	王化坤		31	260	8.0	15.0
5	张晓莹	南京农业大学园艺学院	5	74	4.0	5.0
6	钱剑林		2	34	2.0	2.0
7	邱学林		3	43	3.0	3.0