人鸟氨酸脱羧酶抗酶1突变基因的克隆与原核表达

• 作者: 王艳林 蔡富强 韩钰
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 鸟氨酸脱羧酶抗酶1 突变 原核表达
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 149-153
• 页数: 5页
• 分类号: Q5
• 字数: 3689字
• 语种: 中文

摘要

克隆人鸟氨酸脱羧酶抗酶1(Homo sapiens ornithine decarboxylase antizyme 1,HOAZ1)开放性阅读框+1核糖体移码位点缺失的突变基因,构建突变基因的原核表达质粒,分离纯化其原核表达的重组蛋白.采用巢式-PCR和重叠延伸-PCR技术,从人非小细胞肺癌细胞株A549的cDNA中获得人类鸟氨酸脱羧酶抗酶1开放性阅读框+1核糖体移码(+1RF)位点缺失突变的基因序列(DM-HOAZ1).将该序列克隆到原核表达载体pET-28a(+)后,转化表达菌Rosseta(DE3)感受态细胞.阳性克隆用IPTG诱导重组蛋白表达,然后在尿素变性条件下经Ni-NTA树脂亲和层析纯化重组HOAZ1.原核表达和纯化的HOAZ1重组蛋白用Western Blot鉴定.结果显示,成功获得HOAZ1开放阅读框中+1RF位点缺失的突变基因和该突变基因的原核表达质粒pET-28a(+)/DM-HOAZ1;用pET-28a(+)/DM-HOAZ1转化大肠杆菌后,HOAZ-1可被IPTG诱导性高表达,且表达量随诱导时间延长递增;原核表达的HOAZ1可用Ni-NTA树脂亲和层析有效纯化.建立了原核表达和分离纯化HOAZ1蛋白的试验方法,为进一步研究HOAZ1的功能和临床应用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩钰	三峡大学分子生物学研究所	71	175	7.0	9.0
2	王艳林	三峡大学分子生物学研究所	137	424	11.0	16.0
6	蔡富强	三峡大学分子生物学研究所	15	8	1.0	2.0