茶树谷氨酸脱羧酶基因(GAD)的原核表达及酶活快速检测

• 作者: 宛晓春 邓威威 韩洁云
• 来源期刊: 安徽农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 茶树 谷氨酸脱羧酶 原核表达 TLC 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 茶与食品科学
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: S571.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.13610/j.CnkI.1672-352x.20180302.003

摘要

L-谷氨酸经脱羧酶反应可生成γ-氨基丁酸(GABA),此过程受谷氨酸脱羧酶(glutamic acid decarboxylase,GAD)催化.从茶树转录组库中筛选GAD基因,通过NCBI比对获得其cDNA序列(GenBank登录号为KT728367.1).序列分析表明,GAD基因的ORF全长为1482bp,共编码493个氨基酸,该蛋白为细胞质蛋白,分子量为55.49 kDa,理论等电点为5.44.从舒茶早茶树根部中克隆该基因,并构建pMAL-c5X-GAD表达载体,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测,得到分子量约为55 kDa的目的蛋白.体外酶活反应后用薄层色谱法(TLC)分析,经BAW (Butanol∶Acetic acid∶H2O,4∶1∶2)和75％苯酚水溶液(Phenol∶H2O,3∶1)2种展开剂分离酶促产物,均可检测到GABA的生成.通过实时荧光定量PCR对GAD基因在不同茶树组织的表达水平进行检测,发现GAD在根中表达量最高,而在芽中表达量最低,在其他组织中表达各不相同,其表达具有组织特异性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宛晓春	安徽农业大学茶树生物学与资源利用国家重点实验室	162	3012	29.0	46.0
2	邓威威	安徽农业大学茶树生物学与资源利用国家重点实验室	25	104	6.0	9.0
3	韩洁云	安徽农业大学茶树生物学与资源利用国家重点实验室	1	0	0.0	0.0