人血小板膜糖蛋白GPIbα(H1-V289)的原核表达及其生物活性研究

• 作者: 杨剑峰 白霞 董宁征 谢丽倩 阮长耿 马珍妮
• 来源期刊: 苏州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 血小板膜糖蛋白GPIbα 血小板聚集 瑞斯托霉素
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 1151-1155
• 分类号: R392.11
• 语种: 中文

摘要

目的 获得重组的血小板膜糖蛋白GPIbα的N端片段(1-289氨基酸),进一步研究其在血栓与止血过程中的生物功能.方法 利用质粒pCMV3(编码GPIbαH1-V289)设计引物,构建pQE30-GPIbα(H1-V289)表达载体,转化大肠杆菌M15,IPTG诱导表达蛋白.用Ni-NTA琼脂糖层析柱不同pH值梯度淋洗法纯化蛋白,SDS-PAGE和Western blot鉴定纯化产品纯度和免疫学活性,并观察重组蛋白对瑞斯托霉素和ADP诱导血小板聚集的影响.结果 成功获得纯度较高的重组GPIbα(H1-V289)蛋白,浓度为0.6 mg/ml.Western blot检测结果显示,抗GPIbα单抗SZ2能在34 kd区域显示条带.而且纯品能有效抑制瑞斯托霉素诱导的血小板聚集,对ADP诱导的反应无抑制作用.结论 重组蛋白具有较好的免疫原性和生物活性,并可以大量获得,为开发抗血栓药物奠定了基础.