牛共刺激分子CD80和CD86实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

• 作者: 何延华 宋天增 薄新文 钟发刚 韩猛立 黄新
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: SYBR Green Ⅰ 实时荧光定量聚合酶链反应 牛 CD80 CD86
• 年，卷（期）: 2010,（9）
• 页码范围: 953-958
• 页数: 6页
• 分类号: S852.42
• 语种: 中文

摘要

根据GenBank中牛CD80和CD86基因的序列,在保守区设计并合成各自的特异引物,并以牛3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)基因为内参,采用SYBR Green Ⅰ染料以建立一种检测牛共刺激分子CD80和CD86的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法.将CD80基因扣CD86基因克隆至pMD18-T载体上,转化大肠杆菌DH5α,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR标准曲线并进行熔解曲线分析以及灵敏性、特异性和重复性试验.结果表明,CD80基因、CD86基因和GAPDH基因的C1值与标准品稀释度在1×102～1×108 copies/μL范围均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.991.熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰,特异性和重复性较好.证实,所建立的牛共刺激分子CD80和CD86荧光定量RT-PCR检测方法适用于临床样品的检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	薄新文		3	0	0.0	0.0
2	何延华		3	0	0.0	0.0
3	黄新		6	0	0.0	0.0
4	韩猛立		2	0	0.0	0.0
5	宋天增		1	0	0.0	0.0
6	钟发刚		3	0	0.0	0.0