人类免疫缺陷病毒Ⅰ型Tat真核表达载体的构建及鉴定

• 作者: 刘昭国
• 来源期刊: 实用预防医学
• 学科: 医学
• 关键词: HIV-1 Tat 载体构建 huh-7细胞 表达
• 年，卷（期）: 2010,（10）
• 页码范围: 1961-1964
• 分类号: R373
• 字数: 3558字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-3110.2010.10.013

摘要

目的 构建人类免疫缺陷病毒Tat基因真核表达质粒,并研究该质粒在真核细胞中的有效表达.方法 以含有HIV-1全长基因的质粒pNL4～3为模板,通过PCR扩增HIV-1 Tat第一外显子,应用基因工程技术将扩增的基因片段插入真核表达质粒pcDNA3.1(+),构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-tat,经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定正确后,应用脂质体转染技术转染入huh-7细胞.RT-PCR检测其基因转录情况,Webtern Blot鉴定其是否能够表达相应的目的蛋白质.结果 成功扩增了Tat基因,酶切和测序证明正确构建了重组真核表达质粒pcDNA3.1-tat,RT-PCR和Western blot方法证实该质粒能在huh-7真核细胞中有效表达HIV-1 Tat目的蛋白质.结论 成功构建了HIV-1 Tat基因的真核表达质粒载体,并在huh-7中表达,为在huh-7细胞模型中研究Tat的功能奠定了基础.

作者信息

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1	刘昭国		4	1	1.0	1.0