琯溪蜜柚BAC文库的构建和汁胞粒化相关基因的筛选

• 作者: 姜翠翠 潘东明 潘腾飞 郭志雄 陈桂信
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 琯溪蜜柚 BAC文库 粒化 文库筛选
• 年，卷（期）: 2010,（18）
• 页码范围: 3791-3797
• 分类号: S6
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.18.013

摘要

[目的]构建琯溪蜜柚BAC文库,利用该文库筛选与汁胞粒化相关的基因.[方法]用温和的物理方法获得高分子量DNA,部分酶切后进行回收、连接、转化,超低温保存阳性克隆.构建DNA样品混合样,PCR法筛选文库,生物信息学分析DNA序列.[结果]改进了适合琯溪蜜柚BAC文库构建的方法;构建的琯溪蜜柚BAC文库含有26 112个单克隆,空载率小于1%,叶绿体DNA的污染率不超过1%,插入片段平均大小大约120 kb,覆盖8倍的琯溪蜜柚基因组.利用与琯溪蜜柚汁胞粒化相关的EST序列设计PCR引物筛选文库,得到一段大小为1 088 bp的DNA序列,该序列含有两段大小分别为122 bp和172 bp的内含子,经同源比对发现,该序列中部分序列与蓖麻(Ricinus communis)、杨树(Populus trichocarpa)多铜氧化酶(multicopper oxidase)cDNA序列分别有85%和71%的同源性;与毛叶番荔枝(Annona cherimola)和拟南芥(Arabidopsis thaliana)果胶酯酶(pectinesterase)cDNA序列分别有76%和73%的同源性.[结论]本研究构建的BAC文库适用于琯溪蜜柚功能基因组的研究,从BAC文库筛选获得的DNA序列与汁胞粒化相关的基因有高度同源性.