构建含有小鼠CD40-IgG2aFc-IRS-GFP融合基因腺病毒并体外检测

• 作者: 张启瑜 方益锋 李传光 沈志坚 谭映霞
• 来源期刊: 中华肝胆外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: CD40 PDC316质粒 融合基因 质粒构建 重组腺病毒
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 208-211
• 页数: 4页
• 分类号: R5
• 字数: 3706字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1007-8118.2010.03.017

摘要

目的 构建载有小鼠CD40-IgG2aFc-IRS-GFP融合基因片段的腺病毒载体,并检测其转染293细胞后的融合蛋白表达及出毒情况.方法 提取小鼠CD40、IgG2aFc基因片段构建PDC316-IgG2aFc-GFP质粒,测序成功后包装构建Ad5-PDC316-CD40-IgG2aFc-GFP,转染293细胞.出毒后大量复制病毒并纯化,测定病毒滴度,体外感染细胞观察病毒复制及分泌目的 蛋白情况并检测目的 蛋白表达量.结果 成功构建了质粒及病毒,体外感染显示该病毒能有效的感染细胞并表达蛋白(荧光显示),检测目的 蛋白表达量随时间点及浓度增加而增加.当病毒浓度增加到一定程度时目的 蛋白表达趋于无明显差异性.结论 构建小鼠融合基因片段并成功转入细胞内,分泌表达目的 蛋白是可行的,为进一步研究该病毒在大鼠体内感染及表达CD40Ig、大鼠肝移植模型免疫耐受及其机制的研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张启瑜		228	1166	16.0	20.0
2	沈志坚		45	188	8.0	11.0
3	谭映霞		38	136	8.0	10.0
4	方益锋		6	7	2.0	2.0
5	李传光		9	31	2.0	5.0