同源盒基因IRX1的启动子克隆及其在人胃黏膜细胞中的启动活性分析

• 作者: 于颖彦 刘卫仁 刘炳亚 吴建林 张佳年 朱正纲 计骏 郭晓波 郭磊
• 来源期刊: 中华胃肠外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因,IRX1 启动子 报告基因 胃黏膜细胞
• 年，卷（期）: 2010,（11）
• 页码范围: 846-850
• 分类号: R5
• 字数: 3899字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1671-0274.2010.11.019

摘要

目的 克隆同源盒基因IRX1的核心启动子序列,并探讨其转录调控机制.方法 通过生物信息学预测IRX1基因启动子范围:利用PCR方法扩增并构建含有IRX1基因启动子不同片段的真核报告基因质粒,瞬时转染GES-1胃黏膜细胞,通过检测不同片段的荧光素酶报告质粒活性,判断不同片段的启动子活性.结果 生物信息学预测IRX1基因启动子位于转录起始点上游700 bp范围内.通过PCR技术扩增获得IRX1基因5'侧翼区8个截短片段报告基因质粒,其活性由大到小依次为p-416＞p-584＞p-715＞p-350＞p-687＞p-320＞p-188＞p-92;除p-92与p-188片段外,其余各片段与PGL3-basic空载体的差异均有统计学意义(均P＜0.05),其中以p-416片段活性最强,片段p-320与片段p-188之间出现较大活性落差.结论 IRX1基因上游序列启动子以p-416转录活性最高,核心启动子位于-320～-188区间,该区间具有Sp1、TFⅡD等转录因子结合序列,是下一步转录调控机制研究的重要位点.