基因组步移技术扩增嗜水气单胞菌J-1株脂酶基因全长及原核表达

• 作者: 刘永杰 巢伟 陆承平
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 嗜水气单胞菌 基因组步移 脂酶
• 年，卷（期）: 2010,（9）
• 页码范围: 1-6
• 分类号: S852.6
• 字数: 4491字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2010.09.001

摘要

根据已发表的引物序列合成一对引物,以嗜水气单胞菌J-1株基因组为模板扩增脂酶基因,得到一个保守的383 bp基因片段.进一步应用基因组步移技术扩增其两侧未知序列,分别以DraⅠ,EcoRⅤ,PvuⅡ,ScaⅠ,StuⅠ,SmaⅠ 6个内切酶酶切的基因组构建6个不同的基因组步移文库,再以基因组步移文库为模板,设计引物向已获得的保守片段两侧进行PCR扩增,将扩增到的两侧序列与保守片段拼接后得到一个3 476 bp的片段,通过DNA Star软件分析,找到一个2 415 bp的开放阅读框,经Blast软件分析,其与嗜水气单胞菌ATCC 7966脂酶、嗜水气单胞菌AH-3磷脂酶A1、嗜水气单胞菌H3脂酶、嗜水气单胞菌Mcc-2脂酶、嗜水气单胞菌JMP636磷脂酶C的序列同源性分别为97%、97%、88%、83%和82%.将DNA序列翻译成氨基酸序列后,发现其包含一个多肽序列(VHFLGHSLGA),这个序列在脂酶中高度保守.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陆承平	南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室	387	5495	37.0	51.0
2	刘永杰	南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室	50	409	12.0	18.0
3	巢伟	南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室	1	5	1.0	1.0