碱裂解叶片两步快速制备PCR模板技术研究

• 作者: 王恒波 许莉萍 陈如凯 陈平华 陈由强
• 来源期刊: 热带作物学报
• 学科: 医学
• 关键词: KOH 碱裂解 中和 PCR模板 酶稳定剂
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 生物技术应用及组织培养
• 页码范围: 422-429
• 分类号: R394-33
• 字数: 7448字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2010.03.016

摘要

广泛采用提取DNA作为PCR模板的方法主要有CTAB和SDS法2种,但步骤烦琐、耗时长.根据Taq酶储存液和PCR反应缓冲液所含K+离子、Cl-离子和Tween-20等成分,以0.05 mol/L KOH为强碱裂解物、2%Tween-20为稳定剂配制碱裂解液,以0.05 mol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸(Tris-HCl)和2 mmol/L EDTA为中和液,经加热裂解和中和两步制备PCR模板.以甘蔗叶片为材料,用新鲜配制含KOH和Tween-20的裂解液,将适量叶片放入一定体积的裂解液中加热裂解,再中和,形成裂解混合物.直接以裂解混合物为模板,甘蔗内源基因为靶基因,在优化KOH裂解浓度、模板体积、加热裂解时间以及添加适量聚合酶稳定剂的情况下,PCR反应稳定,重复性强.以有代表性的单子叶和双子叶植物叶片为材料,经过多种内源基因PCR反应的反复验证,证实了这种方法的广泛适用性.该方法通过两步制备PCR模板,无需DNA提取过程,使用材料少,可以实现活体PCR检测,为遗传分析和分子诊断提供简便、快速和高效的分析方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王恒波	福建农林大学农业部甘蔗遗传改良重点开放实验室	13	64	6.0	7.0
2	陈如凯	福建农林大学农业部甘蔗遗传改良重点开放实验室	125	1780	20.0	34.0
3	陈平华	福建农林大学农业部甘蔗遗传改良重点开放实验室	25	201	9.0	11.0
4	陈由强	福建师范大学生命科学学院	103	1191	20.0	29.0
5	许莉萍	福建农林大学农业部甘蔗遗传改良重点开放实验室	59	686	15.0	23.0