利用套叠PCR技术合成人胰岛素原基因的临床研究

• 作者: 周贤婧 王永刚 马建忠
• 来源期刊: 中国现代医药杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 套叠PCR(SOE-PCR) 人胰岛素原 Klenow片段 基因克隆
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 8-11
• 页数: 4页
• 分类号: R4
• 字数: 2287字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-9463.2010.02.003

摘要

目的 设计并分子克隆适宜于大肠杆菌表达系统的人胰岛素原基因.方法 以美国国家基因库(GenBank)发布的人胰岛素原的氨基酸序列为模板,参考大肠杆菌表达系统的密码子偏好性以及所用表达载体(pCEX一3x)的特点,经计算机分析、设计人胰岛素原基因为8个寡核苷酸片段,以重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术体外延伸获得完整的人胰岛素原基因,分子克隆后测定所得基因的核苷酸序列.结果 经限制性内切酶分析确定为重组克隆的质粒进行核苷酸序列分析,结果 表明,我们所克隆的基因序列完全符合我们先前的设计.结论 SOE-PCR技术可用于体外寡核苷酸片段的延伸并获得完整长度的基因.Taq DNA聚合酶延伸反应前以Klenow片段处理可提高较短覆盖末端或较低专一性末端正确延伸的成功率.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王永刚	兰州理工大学生命科学与工程学院	98	348	10.0	14.0
2	马建忠	兰州理工大学生命科学与工程学院	40	94	6.0	8.0
3	周贤婧	兰州理工大学生命科学与工程学院	5	24	3.0	4.0