人表皮生长因子慢病毒载体的构建及表达

• 作者: 冯龙 安玉会 张丽梅 张艳敏 赵国强 马晶 鲍玉洲
• 来源期刊: 郑州大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 人表皮生长因子 慢病毒载体 基因构建
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 603-606
• 分类号: Q789
• 字数: 2834字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6825.2010.04.023

摘要

目的:构建人表皮生长因子(hEGF)慢病毒(LV)载体.方法:酶切并收集pcDNA 3.1-hEGF载体中的hEGF目的基因片段,克隆进入含有绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒载体内,将所得重组体LV-GFP-hEGF与辅助载体pA8.2和pVSVG共同转染人胚肾293T细胞,进行病毒包装.收集上清液,按按10-1～10-7倍比稀释后培养,检测病毒滴度;裂解细胞,进行Western Blot分析.结果:PCR扩增、HindⅢ酶切鉴定及测序结果均证实LV-GFP-hEGF构建成功.将LV-GFP-hEGF转染293T细胞,紫外光下检测可见绿色荧光;LV滴度达5×108TU/mL,转染效率＞75%,Western Blot证实转染细胞町表达hEGF.结论:成功构建了含有GFP报告基因的hEGF慢病毒载体,包装后的慢病毒可在293T细胞内高效表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马晶	郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室	5	19	3.0	4.0
2	冯龙	郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室	13	30	3.0	4.0
3	赵国强	郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室	245	807	11.0	16.0
4	安玉会	郑州大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室	51	260	8.0	13.0
5	张艳敏	河南省眼科研究所分子生物室	7	19	3.0	3.0
6	张丽梅	河南省眼科研究所分子生物室	1	3	1.0	1.0