携带k-ras和c-Myc基因逆转录病毒载体的构建及其转导正常卵巢细胞效能的研究

• 作者: 姚德生 李力 谭媛
• 来源期刊: 广西医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: k-ras基因 c-Myc基因 逆转录病毒载体 MOSE 转导
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 56-59
• 页数: 4页
• 分类号: R737.31
• 字数: 3976字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-930X.2010.01.019

摘要

目的:构建携带k-ras和c-Myc基因的逆转录病毒载体,研究其转导正常小鼠卵巢上皮细胞 (mouse ovarian surface epithelial cell,MOSE)的效能.方法:用基因克隆的方法将k-ras和c-Myc基因插入到载体pLPCX和pLHCX中,构建真核表达质粒pLPC-mMyc和pLHC-kras.将pLPC-mMyc或pLHC-kRas通过脂质体法转导包装细胞Ecotropic Pheonix细胞,提取含有携带目的基因的重组病毒上清,转染MOSE,获取携带c-Myc和k-ras基因的MOSE细胞株,分别命名为MOSE-Myc细胞和MOSE-Ras细胞,同时拮抗Puromycin和Hygromycin的MOSE细胞株,命名MOSE-RM细胞.用RT-PCR和Western blot检测目的癌基因和蛋白质在MOSE细胞的表达.将MOSE、MOSE-Myc、MOSE-Ras、MOSE-RM被分别注射到CD1裸鼠腹腔,60 d后处死所有裸鼠,解剖检查,观察成瘤情况和生存时间,并进行免疫组织化学染色.结果:RT-PCR能检测到目的基因c-Myc(943 bp)和k-ras(620 bp)mRNA特异的条带,Western blot在转基因细胞株中能检测到c-Myc(67ku)和k-ras (21 ku)基因蛋白质的表达.MOSE-RM和MOSE-Ras组在裸鼠体内均能形成肿瘤,而MOSE和MOSE-Myc在实验结束时均未能形成肿瘤.免疫组织化学染色显示MOSE-Ras和MOSE-RM组k-ras蛋白均呈强阳性,定位于细胞膜;MOSE-RM组c-Myc蛋白呈强阳性,位于细胞核.结论:真核表达质粒pLPC-mMyc和pLHC-kras能够通过逆转录病毒将k-ras和c-Myc高效导入正常小鼠卵巢上皮细胞MOSE,表达目的蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李力	广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科	377	1810	20.0	26.0
2	姚德生	广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科	90	398	11.0	15.0
3	谭媛	广西医科大学研究生学院	7	16	3.0	3.0