pEGFP-mINF-γ转染人卵巢癌细胞SKOV3及其对细胞生长的抑制作用

• 作者: 关咏梅 吴娇磊 张慧雅
• 来源期刊: 中国优生与遗传杂志
• 学科: 医学
• 关键词: γ-干扰素 肿瘤治疗 基因转然 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 所属期刊栏目: 分子、生化遗传学与PCR技术
• 页码范围: 38-40,封2
• 页数: 4页
• 分类号: R737.31
• 语种: 中文

摘要

目的 构建绿色荧光蛋白联合γ干扰素(pEGFP-mINF-γ)真核表达质粒,探讨γ-干扰素对卵巢癌细胞系skov3细胞生长的影响.方法 将重组质粒转染入卵巢癌细胞株skov3中,获得稳定表达INF-γ细胞株,设空质粒转染组(skov3-pEGFP组)和空白对照组(skov3组);逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)法检测目的 基因的表达,双抗体夹心酶联免疫吸附实验(ELISA)方法测定INF-γ的分泌量;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和荧光显微镜下细胞染色法检测INF-γ对skov3细胞体外生长和凋亡等生物学行为的影响.结果 RT-PCR和ELISA法证实重组质粒已整合到skov3细胞并获稳定表达;MTT法检测细胞的增值速度及细胞抑制率,pEGFP-mINF-γ组第5天的细胞抑制率为21.67%,明显高于skov3-pEGFP和skov3组,P＜0.005;Hoechst染色检测结果显示skov3-mINF-γ组细胞凋亡,荧光显微镜下skov3-mINF-γ组凋亡细胞明显多于skov3-pEGFP组和skov3-nul组,差异有统计学意义(P＜0.05),skov3-pEGFP组和skov3组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 成功构建真核表达质粒pEGFP-mINF-γ,该质粒转染人卵巢癌细胞skov3可抑制其生长,并不影响INF-γ的分泌量,异种INF-γ基因可能对人上皮性卵巢癌起重要作用.