慢病毒介导的增强型绿色荧光蛋白报告基因对间充质干细胞的标记

• 作者: 单鸿 周斌 姜在波 孟晓春 朱康顺 李丹 李征然 王劲 颜荣华 黄明声
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 干细胞 慢病毒属 增强型绿色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2010,（19）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1357-1361
• 分类号: R3
• 字数: 3590字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2010.19.016

摘要

目的 探讨慢病毒介导的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记间充质干细胞(MSC)是否影响其细胞生物学特性,以及EGFP基因能否持久稳定表达.方法 以不同病毒感染复数(MOI)实行EGFP慢病毒对MSC的感染,通过流式细胞分析法(FACS)检测EGFP的阳性率,并在荧光显微镜下观察EGFP在MSC的表达情况;通过锥虫蓝染色、MTT比色法、Hoechst染色和FACS检测细胞活力、增殖、凋亡和周期;EGFP慢病毒感染MSC体外持续培养2、4、8、16周时通过FACS检测EGFP的阳性率和荧光强度,以评价EGFP基因在MSC表达的稳定性.结果 EGFP慢病毒以MOI=20感染MSC 96 h,EGFP阳性率达97.39%±0.68%;与对照MsC相比,EGFP慢病毒感染MSC时,对细胞活力、增殖、凋亡和周期均没有影响(P＞0.05);EGFP-MSC在体外持续培养2,4、8、16周,EGFP阳性率分别为97.50%±0.54%、97.32%±0.51%、97.39%±0.11%、97.48%±0.13%,荧光强度(A值)分别为440 ±13、445±12、458±13、456±16,均能够保持稳定水平.结论 EGFP慢病毒能够高效标记MSC,并且不影响其生物学特性,EGFP基因在MSC能够持久稳定表达,可以用于下一步的细胞示踪研究.