β-arrestin 2抗基因RNA对小鼠C17.2神经干细胞μ阿片受体脱敏感化的影响

• 作者: 刘希江 徐懋 杨辉 田玉科 陈莎莎 高峰
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 基因沉默 抗基因RNA β-arrestin 2 阿片受体 神经干细胞
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 82-85
• 页数: 4页
• 分类号: R394.2
• 字数: 4109字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.01.017

摘要

背景:前期实验中采用新型基因沉默方法--抗基因RNA下调了细胞内β-arrestin 2基因的表达,实现细胞水平的基因敲除效应.目的:在前期实验基础上,观察抗基因RNA下调小鼠C17.2神经干细胞β-arrestin 2基因表达后其对DAMGO诱导μ阿片受体脱敏感化的影响.方法:小鼠C17.2神经干细胞应用含体积分数为10%胎牛血清、10 mg/L青霉素和10 mg/L氨苄青霉素的DMEM培养基,置于37 ℃,体积分数为5% CO_2培养箱进行培养.待细胞长至80%汇合,用0.25%胰蛋白酶消化传代,每五六天传代1次.通过RT-PCR和免疫细胞化学法检测C17.2细胞μ阿片受体的表达.在脂质体介导下,将已被证实具有基因沉默效应的抗基因RNA片段转染C17.2细胞,荧光显微镜下观察转染24 h后绿色荧光蛋白的表达.应用μ阿片受体选择性激动剂DAMGO和[~(35)S]GTPγS结合实验检测C17.2细胞μ阿片受体与G蛋白的耦联能力.结果与结论:RT-PCR结果证实C17.2细胞内有μ阿片受体存在,而免疫细胞化学结果显示μ阿片受体主要在细胞膜和细胞浆中表达.荧光显微镜下观察可见转染质粒pGPU6/GFP/Arrb9的C17.2细胞中有绿色荧光蛋白的表达.[~(35)S]GTPγS结合实验结果显示:未应用DAMGO进行处理的细胞中,[~(35)S]GTPγS结合的刺激比率为(253±17)%;应用DAMGO预先对细胞进行处理后,刺激比率降为(113±14)%(P < 0.05);而转染β-arrestin 2抗基因RNA的细胞在DAMGO刺激下,[~(35)S]GTPγS结合的刺激比率则仍维持在(239±15)%,表明抗基因RNA下调β-arrestin 2的表达,可抑制μ阿片受体脱敏感的产生.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高峰	华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室	89	489	12.0	18.0
2	田玉科	华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室	218	1564	18.0	31.0
3	杨辉	华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室	52	362	9.0	17.0
4	徐懋	北京大学第三医院麻醉科	49	277	11.0	15.0
5	刘希江	华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室	11	28	2.0	4.0
6	陈莎莎	华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室	6	12	2.0	3.0