大鼠OSP-1启动子克隆与表达检测

• 作者: 于今非 刘庆友 李明鸿 石德顺 谢琴
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: OSP-1启动子 水牛 卵巢特异表达
• 年，卷（期）: 2010,（24）
• 页码范围: 13190-13192,13202
• 分类号: S826.1
• 字数: 3243字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2010.24.102

摘要

[目的]克隆大鼠卵巢特异性启动子(OSP-1)片段,并在细胞水平检测该启动子调控标记基因的组织特异性表达.[方法]参考已知大鼠OSP-1序列设计特异性引物,PCR扩增大鼠OSP-1启动子片段并与已公布的大鼠OSP-1序列进行比较.将OSP-1启动子定向克隆到去除CMV的pEGFP-N1载体,构建真核表达载体pOSP-1-EGFP-N1;重组质粒在脂质体LipofectamineTM2000介导下,分别转染水牛的颗粒细胞、乳腺上皮细胞和胎儿成纤维细胞,并于转染后12,24和48 h在荧光显微镜下观察EGFP表达情况.[结果]OSP-1启动子扩增片段长480 bp,与已公布的大鼠OSP-1序列的相似性达96%;应用启动子预测软件对所得序列分析表明,该扩增片段含有类似于TATA box和CAAT box的核心启动顺式元件,并含有多个C/EBP beta转录因子的结合位点;在颗粒细胞转染后12 h可观测到绿色荧光表达,转染后24 h荧光细胞增多,细胞形态均呈圆形、体积较大,48 h荧光细胞数量骤减,且死细胞增多;在乳腺上皮细胞和胎儿成纤维细胞均未检测到EGFP基因表达.[结论]大鼠OSP-1启动子控制下的EGFP基因可在水牛颗粒细胞中特异表达,为构建水牛卵巢特异性表达转基因载体奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	石德顺	广西大学动物繁殖研究所	241	1058	14.0	21.0
2	刘庆友	广西大学动物繁殖研究所	54	200	7.0	11.0
3	谢琴	广西大学动物繁殖研究所	4	21	3.0	4.0
4	李明鸿	广西大学动物繁殖研究所	3	10	2.0	3.0
5	于今非	广西大学动物繁殖研究所	1	4	1.0	1.0