大肠埃希菌嘌呤核苷磷酸化酶基因载体的构建及对胰腺癌细胞的作用

• 作者: 李克强 李文林 石小玉 赵林 饶泽昌
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 大肠埃希菌嘌呤核苷磷酸化酶 自杀基因 载体 胰腺癌
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 313-317
• 分类号: Q782
• 字数: 4291字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2011.04.007

摘要

目的 构建大肠埃希菌(Escherichia coli)嘌呤核苷磷酸化酶(purine nucleoside phosphorylase,PNP)基因表达载体,研究其生物活性,为肿瘤的基因治疗奠定基础.方法 PCR扩增大肠埃希菌K12的PNP基因,T4连接酶将PNP连接入pMSCV逆转录病毒载体,构建重组逆转录病毒载体pMSCV/PNP.pMSCV/PNP转化感受态大肠埃希菌XL1-Blue,提取pMSCV/PNP,酶切、PCR和测序鉴定.病毒包装细胞293产生重组逆转录病毒pMSCV/PNP,流式细胞仪测病毒滴度.pMSCV/PNP转染胰腺癌细胞BXPC-3,倒置荧光显微镜观察,FACS分离转染阳性细胞(GFP阳性).RT-PCR检测PNP mRNA在胰腺癌细胞BXPC-3 细胞中的表达,MTT法检测PNP基因的生物活性.结果 PCR扩增出大肠埃希菌PNP基因(738 bp),酶切和PCR的电泳条带显示pMSCV/PNP,测序结果正常.293包装细胞产生高滴度(3.6×107 U/ml)重组逆转录病毒pMSCV/PNP.RT-PCR实验结果表明,pMSCV/PNP转染的胰腺癌细胞BXPC-3表达PNP mRNA.前药6-甲基嘌呤-2′-脱氧核苷(MePdR)作用72 h 浓度达1.00 mg/L,BXPC-3/PNP细胞存活率为10.09 %,随着MePdR浓度加大,BXPC-3/PNP细胞存活率继续下降直至为0.结论 构建了pMSCV/PNP载体,获得了表达大肠埃希菌PNP基因的BXPC-3细胞克隆,PNP/MePdR自杀基因系统对胰腺癌细胞BXPC-3有较强的抑杀作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李克强	宁波市第二医院普外科	23	58	4.0	6.0
2	石小玉	南昌大学医学院组织胚胎学教研室	30	50	5.0	6.0
3	李文林	南昌大学医学院病理生理学教研室	24	58	4.0	6.0
4	赵林	江西省医学科学研究所医学生物高技术重点实验室	21	100	6.0	9.0
5	饶泽昌	江西省医学科学研究所医学生物高技术重点实验室	2	0	0.0	0.0