斑玉蕈酸性磷酸酯酶的酶学性质研究

• 作者: 图力古尔 杨立红 缪静 高兴喜
• 来源期刊: 菌物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 斑玉蕈 酸性磷酸酯酶 动力学特性 酶活力
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 744-752
• 分类号: Q939.506
• 语种: 中文

摘要

以斑玉蕈为材料分别从菌盖和菌柄中提取一种酸性磷酸酯酶(ACPase,EC.3.1.3.2),进一步用硫酸铵沉淀分离,SephadexG-200柱纯化,从菌盖中分离到3个酶组分,从菌柄中分离到4个酶组分,分别对菌盖和菌柄的酶Ⅰ和酶Ⅰ′进行聚丙烯酰胺凝胶( PAGE)电泳纯度鉴定,均呈现单一酶蛋白带.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定酶Ⅰ和酶Ⅰ′的相对分子量均为65kDa,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及SephadexG-75凝胶过滤测定分析,酶Ⅰ和酶Ⅰ′均为单亚基蛋白.紫外吸收光谱(UV)测定结果表明,酶Ⅰ和酶Ⅰ 均呈现两个吸收峰,分别在220nm和280nm处;酶Ⅰ和酶Ⅰ′等电点(pI)分别为5.4和5.0；水解对硝基苯磷酸二钠(PNPP)最适pH值分别为5.0和4.6;酶促反应的最适温度均为50℃,并均有热激活现象,热激活温度均为60℃；耐热实验表明,酶Ⅰ和酶Ⅰ′在最适温度下温育45min后,酶活力分别为最高酶活力的60.2%和57.3%,酶Ⅰ在温育20min时表现最大活性,酶Ⅰ′在温育25min时表现最大活性；酶Ⅰ和酶Ⅰ′在60℃保温25min活力分别下降至最大活力的19.33%和15.25%,且保温时间越短酶活性越大.酶Ⅰ和酶Ⅰ′的酶促反应初速度(υ)分别为17.1×10-3μmol/min和11.3× 10-3μmol/mim最大反应速度(Vmax)分别为27.6×10-3μmol/min和85.0×10-3μmol/min,米氏常数(Km)值分别为4.095×10-3mol/L和36.3×10-3mol/L,酶Ⅰ的专一性常数Kcat/Km=3.846× 105 (mol/L)-1 S-1,酶Ⅰ′的Kcat/Km=1.11×105 (mol/L)-1 S-1,酶Ⅰ的Kcat/Km比酶Ⅰ′的Kcat/Km大3.46倍.重金属离子Hg2+、Ag+、Cd2+和pb2+对酶均有抑制作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨立红	鲁东大学生命科学学院山东省食用菌技术重点实验室	38	484	14.0	19.0
2	高兴喜	鲁东大学菌物科学与技术研究院	25	197	10.0	12.0
3	图力古尔	鲁东大学菌物科学与技术研究院	33	253	10.0	14.0
4	缪静	鲁东大学生命科学学院山东省食用菌技术重点实验室	57	250	10.0	14.0