siRNA抑制感染细胞模型中HCV复制的研究

• 作者: 何继亮 邢小康 陈智
• 来源期刊: 浙江大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎病毒属/遗传学 RNA,小分子干扰/遗传学 丙型肝炎 RNA干扰 小干扰RNA(siRNA) HCV复制 NS5B 感染细胞
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 专题报道
• 页码范围: 582-587
• 分类号: R512.63
• 字数: 4497字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2011.06.002

摘要

目的:探讨siRNA能否有效抑制丙型肝炎病毒(HCV)感染细胞中HCV的复制.方法:用HCV JC1质粒体外制备HCV RNA转录体,转染Huh-7.5.1细胞,收集细胞上清,再次孵育Huh-7.5.1细胞以建立HCV感染细胞模型,并用间接免疫荧光检测细胞内HCV核心蛋白的表达.将针对HCV NS5B基因的siRNA转染HCV感染细胞(浓度为4、40和200 nmol/L,时间为24 h、48 h和72 h),将4、40和200 nmol/L siRNA转染正常Huh-7.5.1细胞,并设空白对照、脂质体对照、无关siRNA对照以及IFNα-2b(1 000 IU/ml)组,用荧光定量PCR检测细胞内HCV RNA和PKRmRNA水平.结果:HCV感染的Huh-7.5.1细胞中检测出HCV核心蛋白表达.40 nmol和200nmol/L siRNA 24 h组及4、40、200 nmol/L siRNA 48 h和72 h组,HCV RNA水平分别降至58％、54％、29％、17％、17％、33％、22％、19％,明显低于对照组(P＜0.05或P＜0.01).1 000 IU/mlIFN的各时间组HCV RNA水平均明显低于对照组(P＜0.05或P＜0.01).各浓度siRNA组的PKR mRNA的表达与对照组无明显差异(P＞0.05).结论:针对HCV NS5B区的siRNA能够明显抑制HCV感染细胞中HCV的复制,而不引起双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)基因表达的激活.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈智	浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室	162	1080	15.0	27.0
2	何继亮	浙江大学医学院环境医学系	25	124	6.0	10.0
3	邢小康	浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室	7	20	3.0	4.0