重组泛素连接酶PTB-U-box/RING的构建与表达

• 作者: 李霞 王秦豪 申亮亮 茹懿 药立波
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 重组泛素连接酶 重组质粒 基因表达与构建
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 100-104
• 分类号: R34
• 字数: 3639字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2011.02.002

摘要

目的 构建重组泛素连接酶PTB-U-box、PTB-RING,并克隆进入pFLAG-CMV4真核表达载体,为研究靶向降解受体型酪氨酸激酶IGF-IR,抑制肿瘤细胞生长提供基础.方法 分别设计引物,扩增接头分子IRS-1的PTB结构域以及E3泛素连接酶CHIP的U-box、Cbl的RING结构域,再利用重组PCR,将PTB分别与U-box、RING进行融合,双酶切之后将其插入真核表达载体pFLAG-CMV4,经过酶切鉴定及测序后,转染HeLa细胞,Western 印迹验证重组质粒的表达.结果 PCR结果显示PTB-U-box条带大小840 bp,PTB-RING大小为620 bp,重组质粒经酶切鉴定和测序结果正确,转染后可见融合蛋白的表达.结论 成功构建真核重组表达载体pFLAG-CMV4-PTB-U-box和 pFLAG-CMV4-PTB-RING,并且转染HeLa细胞后证实其能够正确表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	药立波	第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室	160	1030	16.0	24.0
2	李霞	第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室	36	99	5.0	8.0
3	茹懿	第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室	14	20	2.0	4.0
4	王秦豪	第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室	12	9	2.0	2.0
5	申亮亮	第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室	6	18	3.0	4.0