重组泛素连接酶SH2-U-box/RING的构建与表达

• 作者: 李瑗春 李霞 王秦豪 茹懿 钟代星
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 泛素 慢性粒细胞白血病 重组质粒
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 6-10
• 分类号: Q783
• 字数: 3629字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2012.01.002

摘要

目的 构建重组泛素连接酶SH2-U-box、SH2-RING,并克隆进入pFlag-CMV4真核表达载体,为研究靶向降解慢性粒细胞白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)患者瘤细胞中过度活化的BCR/ABL,抑制肿瘤细胞的生长提供基础.方法 设计引物,扩增接头分子Grb2的SH2结构域以及E3泛素连接酶CHIP的U-box、Cbl的RING结构域,通过重组PCR,将SH2分别与U-box、RING进行融合,融合片段双酶切之后插入真核表达载体pFlag-CMV4,经过酶切鉴定及测序后,转染HEK293T细胞,Western 印迹验证重组质粒的表达.结果 PCR结果提示SH2-U-box条带大小888 bp,SH2-RING大小为633 bp,重组质粒酶切鉴定和测序结果均正确,转染后可见融合蛋白的表达.结论 成功构建真核重组表达载体pFlag-CMV4-SH2-U-box和 pFlag-CMV4-SH2-RING,转染HEK293T细胞后能够正确表达,为后续研究奠定了基础.