人类心脏发育候选基因KLHL31RNAi逆转录病毒载体系统的构建与鉴定

• 作者: 叶湘漓 周军媚 王跃群
• 来源期刊: 湖南师范大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 心脏发育 KLHL31 pSUPER RNAi
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 5-8
• 分类号: Q782
• 字数: 3033字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-016X.2011.01.002

摘要

目的:利用siRNA表达载体构建抑制人类心脏发育候选基因KLHL31表达的pSUPER RNAi载体( pSUPER-KLHL31).方法:化学合成一对编码短发夹RNA序列的、靶向心脏发育候选基因KLHL31的寡核苷酸链60个碱基,退火,克隆到经BglⅡ、Xho Ⅰ双酶切的pSUPER质粒上,构建重组RNAi质粒(pSUPER -KLHL31),通过酶切鉴定及测序分析验证构建效果,将正确构建的质粒转染大鼠心肌细胞H9c2,建立产生逆转录病毒的细胞克隆.通过Western blotting检测转染pSUPER-KLHL31后细胞中KLHL31蛋白的表达量.结果:pSUPER-KLHL31载体经酶切鉴定及测序分析,结果表明60个碱基成功插入到预计位点,且序列完全一致；重组载体转染包装细胞,可表达绿色荧光蛋白,表明包装成功；Western blotting检测结果显示转染pSUPER -KLHL31的细胞中KLHL31蛋白表达量明显降低.结论:靶向KLHL31的pSUPER RNAi载体构建成功,为进一步从分子水平探讨KLHL31在心脏发育中的功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	叶湘漓	湖南师范大学生命科学学院	41	104	5.0	9.0
5	周军媚	南华大学药学与生命科学学院	19	75	4.0	8.0
9	王跃群	湖南师范大学生命科学学院	27	114	5.0	10.0