小泛素样修饰蛋白-1对α-突触核蛋白基因突变或过表达诱导的细胞包涵体形成及细胞凋亡的影响

• 作者: 廖小平 文国强 欧阳锋 邓益东 郭敏 陈涛 龙志刚
• 来源期刊: 中华医学遗传学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: α-突触核蛋白基因 小泛素修饰蛋白-1 细胞包涵体 细胞凋亡 帕金森病
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 511-516
• 分类号: R394
• 字数: 5568字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1003-9406.2011.05.008

摘要

目的 探讨α-突触核蛋白(α-synuclein)的小泛素样修饰蛋白(small ubiquitin-like modifier,SUMO)-1对α-synuclein基因过表达或突变诱导的细胞包涵体形成及细胞凋亡的影响.方法 构建野生型(WT)、A53T突变型和缺失SUMO-1互作氨基酸的K96R突变型、K96R-A53T突变型α-synuclein真核表达质粒.应用脂质体介导转染方式将构建好的质粒转入HEK293细胞；48 h后Hoechst 33258染色,采用Axiovert200型倒置荧光显微镜观察对细胞的影响,应用四甲基偶氮唑盐检测细胞活力,Annexin V-PE流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 将构建所得真核表达质粒经双酶切鉴定及DNA测序证实；将WT型、A53T型、K96R型、K96R-A53T型α-synuclein真核表达质粒转染HEK293细胞,48 h后伊红染色显示转染野生型α-synuclein- pEGFP组及A53T突变型组某些细胞胞浆内出现圆形的嗜酸性小体(类Lewy小体)形成,分别占细胞总数的9.4％和11.7％,转染K96R及K96R-A53T融合表达载体组细胞内嗜酸性小体形成比率为10.2％和9.8％,两两相比差异无统计学意义(P＞0.05).Hoechst染色结果显示,WT组、A53T组细胞核变大,出现着色不均,染色质聚集成斑点状,未见核浓缩或核碎裂.K96R组及K96R-A53T组胞核着色基本均匀.采用四甲基偶氮唑盐法结果显示转染空质粒组细胞活力为96.2％,转染WT组、A53T组细胞活力下降至53.4％及56.1％,转染K96R组及K96R-A53T组细胞活力为72.3％和69.8％；转染48 h后,WT组、A53T组细胞凋亡率分别为32.2％和34.1％,转染K96R组及K96R-A53T突变组细胞凋亡率下降为19.4％和20.3％,两两相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 SUMO-1对α-synuclein基因过度表达及α-synuclein基因致病突变A53T诱导的细胞包涵体的形成无明显影响；SUMO-1可加强α-synuclein基因过度表达及α-synuclein基因致病突变A53T诱导的细胞毒性及细胞凋亡,提示SUMO-1参与了细胞凋亡过程.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈涛	海南省人民医院神经内科	36	258	9.0	15.0
2	廖小平	海南省人民医院神经内科	29	201	8.0	13.0
3	文国强	海南省人民医院神经内科	87	417	11.0	17.0
4	郭敏	海南省人民医院神经内科	81	461	11.0	16.0
5	龙志刚	海南省人民医院神经内科	17	106	5.0	10.0
6	邓益东	海南省人民医院神经内科	28	92	5.0	8.0
7	欧阳锋	海南省人民医院神经内科	30	251	8.0	15.0