欧蓍草花粉主要过敏原Par j1的重组表达及鉴定

• 作者: 何颖 林德球 程江丽 邹泽红 陶爱林
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 欧蓍草 花粉过敏原 Par j 1.0102 密码子优化 克隆 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2011,（8）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 726-730
• 分类号: R392.11
• 字数: 4493字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2011.08.011

摘要

目的:克隆、表达和纯化欧蓍草花粉主要过敏原Par j 1.方法:根据Par j 1.0102在GenBank中的序列号获得其核苷酸和氨基酸序列,确定开放阅读框,采用DNAstar软件优化密码子,合成全基因,并克隆到表达载体pET-44a中,转化表达宿主大肠杆菌Rosetta,优化蛋白表达条件并进行亲和层析纯化和Western blot鉴定.结果:PCR扩增及重组质粒测序结果表明成功地构建了pET-44a+/Par j 1.0102原核表达质粒.对表达菌表达条件进行优化,最终确定在30℃,IPTG浓度为1.0 mmol/L,诱导4小时时蛋白表达量最高,重组蛋白经亲和层析纯化,SDS-PAGE分析纯化产物在23 kD处有明显的条带.Western blot表明重组蛋白具有与StrepII标签抗体结合活性.结论:国内首次获得融合StrepII标签的Par j 1.0102重组蛋白,为欧蓍草花粉过敏诊断及特异性免疫治疗奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林德球	华南师范大学生命科学学院	12	167	8.0	12.0
2	程江丽	华南师范大学生命科学学院	1	3	1.0	1.0