法桐花粉主要过敏原基因Pla a1重组表达及鉴定

• 作者: 刘昀 吴媛媛 孙秀珍 李满祥 王贵佐 邹泽红 陶爱林
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 法国梧桐花粉 主要过敏原 密码子优化 表达 纯化 鉴定
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 535-539
• 分类号: R392.8
• 字数: 4864字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2012.06.012

摘要

目的:表达、纯化和鉴定法国梧桐花粉主要变应原基因Platanus acerifolia pollen allergen1(Pla a1).方法:首先根据文献查找并在GenBank获取法国梧桐花粉主要变应原基因序列Pla a1,利用DNAStar软件进行密码子优化;合成全基因;将Pla a1与载体pET-44a连接后转入大肠杆菌Rosetta中进行诱导并优化目的蛋白表达;利用亲和层析法纯化该外源表达蛋白;应用Western blot,利用法桐花粉过敏患者血清鉴定纯化后的目的蛋白的抗原性.结果:成功构建了pET44a-Pla a1阳性质粒;获得了法桐花粉主要变应原重组蛋白Pla a1;对该重组蛋白进行了亲和层析纯化;免疫印记法表明重组蛋白具有一定的抗原性.结论:首次利用密码子优化的方法获得融合Strep Tag Ⅱ的法桐花粉过敏原重组蛋白Pla a1,为制备高纯度变应原、重组低致敏过敏原及变应原核酸疫苗奠定基础.