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法国梧桐花粉变应原Pla a1基因的克隆与原核表达
法国梧桐花粉变应原Pla a1基因的克隆与原核表达
作者:
万远芳
刁庆春
柴友荣
马丽娟
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
法国梧桐花粉
变应原
原核表达
摘要:
目的 克隆编码法国梧桐花粉主要变应原(Platanus acerifolia pollen allergen 1)的Pla a1基因,并构建原核表达载体进行表达.方法 采用RT-PCR法从法国梧桐花粉总RNA中扩增Pla a1基因全长cDNA以及不含信号肽的编码区,克隆至pMD18-T载体中进行测序.采用SalⅠ+SphⅠ双酶切,将不含信号肽的编码区定向亚克隆到pQE-30载体,形成原核表达载体pQE-30-Pla a1E,转化大肠杆菌M15菌株,PCR和酶切图谱鉴定为阳性的克隆子采用IPTG诱导表达,采用SDS-PAGE电泳检测蛋白表达结果.结果 通过RT-PCR从法国梧桐花序总cDNA中扩增出了Pla a1基因的全长cDNA,与已报道序列基本一致,但发现该基因在非编码区存在SNP位点,尤其是在起始密码子ATG之前的Oligo A序列存在长度多态性.本研究还克隆了一条与Pla a1高度同源的新基因Pla a1′的大部分编码区序列.以基因组DNA为模板的对比克隆表明,该基因没有内含子.克隆子菌液PCR和质粒酶切图谱鉴定均表明,pQE-30-Pla a1E构建成功.IPTG诱导的含有pQE-30-Pla a1E的大肠杆菌M15菌液表达的具有6×His标签的PLA A1E蛋白,经SDS-PAGE电泳,显示了一条约16kd的条带.结论 发现了法国梧桐花粉主要变应原Pla a1基因的多态性位点,克隆了与其高度同源的另一条新基因Pla a1′的大部分编码区,成功构建了原核表达载体pQE-30-Pla a1E,并在大肠杆菌中获得高效表达,为获得重组纯化Pla a1变应原并用于花粉变应性疾病的诊治奠定了基础.
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文献信息
篇名
法国梧桐花粉变应原Pla a1基因的克隆与原核表达
来源期刊
重庆医学
学科
医学
关键词
法国梧桐花粉
变应原
原核表达
年,卷(期)
2008,(12)
所属期刊栏目
皮肤专题
研究方向
页码范围
1277-1279
页数
3页
分类号
R593.1
字数
3713字
语种
中文
DOI
10.3969/j.issn.1671-8348.2008.12.004
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
刁庆春
重庆市第一人民医院皮肤科
119
459
12.0
14.0
2
万远芳
重庆市第一人民医院皮肤科
11
36
4.0
5.0
3
柴友荣
西南大学农学与生物科技学院重庆市作物品质改良重点实验室
22
191
6.0
13.0
4
马丽娟
西南大学农学与生物科技学院重庆市作物品质改良重点实验室
3
37
1.0
3.0
传播情况
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同被引文献
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二级引证文献
(0)
1987(1)
参考文献(1)
二级参考文献(0)
1994(1)
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二级参考文献(0)
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参考文献(0)
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二级参考文献(2)
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2004(2)
参考文献(2)
二级参考文献(0)
2006(1)
参考文献(1)
二级参考文献(0)
2008(0)
参考文献(0)
二级参考文献(0)
引证文献(0)
二级引证文献(0)
研究主题发展历程
节点文献
法国梧桐花粉
变应原
原核表达
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
重庆医学
主办单位:
重庆市卫生信息中心
重庆市医学会
出版周期:
半月刊
ISSN:
1671-8348
CN:
50-1097/R
开本:
大16开
出版地:
重庆市渝北区宝环路420号
邮发代号:
78-27
创刊时间:
1972
语种:
chi
出版文献量(篇)
30732
总下载数(次)
32
总被引数(次)
193615
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