转基因水稻Bt汕优63的整合结构和品系特异性定量PCR方法

• 作者: 彭于发 王奕海 王锡锋 苏长青 谢家建
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 抗虫水稻 Bt汕优63 标准质粒 品系特异性 实时PCR
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 434-441
• 分类号: S513
• 字数: 4413字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn. 1674-7968.2011.03.005

摘要

为更好地监测转基因抗虫水稻(Oryza sativa L.)Bt汕优63品系的存在,满足转基因标识管理的要求,同时也为了解决阳性植物基因组DNA不容易获得的问题,本研究采用热不对称交互PCR(TAIL-PCR)、Genome Walking和长链PCR(LD-PCR)方法测定了基因枪转化的转cry1Ab/cry1Ac融合基因水稻品系Bt汕优63的外源插入DNA全序列,构建了含有Bt汕优63 3′旁侧和水稻内标基因gos9序列的标准质粒分子pMDBt63作为标准物质,建立了Bt汕优63实时荧光定量PCR方法.外源插入DNA全长9 818bp,位于水稻基因组10号染色体(AP008214)第5348630位,由8个来源于两个转化质粒的DNA片段组成,其中两个cry1Ab/cry1Ac表达框以正向串连的方式插入.gos9和3′旁侧两个定量标准曲线的相关系数(R2)分别为0.9997和0.9992,扩增效率(E)分别为98.05%和99.46%.每反应100 ng模板DNA的检测限(LOD)为10拷贝,定量限(LOQ)为100拷贝.此外,对已知5%和1%转基因含量的混合样品DNA进行定量检测,结果的平均值分别为4.98%和1.07%.结果表明标准质粒pMDBt63作为标准物质建立的定量方法可用于Bt汕优63的定量检测.