qRT-PCR检测结核分枝杆菌蛋白抗原编码基因表达水平

• 作者: 张娟 张辉 李永祥 王远志 米利古 袁俐 陈伟 魏克娜
• 来源期刊: 中国实验诊断学
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 Ag85B 38kDa MPT64 实时定量PCR
• 年，卷（期）: 2011,（12）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 2004-2007
• 分类号: R392.1
• 字数: 2800字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-4287.2011.12.005

摘要

目的 运用实时定量PCR(quantitative real-time,qRT-PCR)检测结核分枝杆菌蛋白 Ag85B、38kDa及MPT64编码基因的表达水平,探讨结核分枝杆菌耐药菌株和敏感株,北京基因型和非北京基因型的蛋白抗原在转录水平的差异性及qRT-PCR诊断活菌的价值.方法 根据Genbank提供的序列,设计目的 基因fbpB、psts1、mpt64及内参基因Sigа的特异性引物,将扩增片段克隆入载体pMD18-T simple,重组质粒经纯化及倍比稀释,应用SYBR GreenⅠ荧光染料建立检测fbpB、psts1、mpt64基因表达水平的实时定量PCR方法.选用46株结核分枝杆菌临床分离株,以及2株非结核分枝杆菌.应用qRT-PCR检测上述菌株、H37Rv国际标准株fbpB、psts1、mpt64基因的表达水平.结果 结核分枝杆菌活菌的扩增结果呈典型的S型曲线,而结核分枝杆菌死菌和非结核分枝杆菌呈水平直线,没有检测到荧光信号;耐药组中的mpt64基因表达水平低于敏感组及H37Rv标准株,有统计学意义(t=3.093,P＜0.01;t=2.545,P＜0.05),北京基因型组中的psts1基因表达水平低于非北京基因型组及H37Rv标准株.结论 有统计学意义(t=2.567,P＜0.05;t=2.373,P＜0.05).结论 成功建立了fbpB、psts1、mpt64基因的qRT-PCR检测方法,该方法可以快速判断活菌与死菌.检测发现耐药组中的mpt64基因表达水平低于敏感组及H37Rv标准株;北京基因型组中的psts1基因表达水平低于非北京基因型组及H37Rv标准株.