假单胞菌YZ-26来源环酰亚胺水解酶中半胱氨酸残基的反应性及功能

• 作者: 刘晓琴 石亚伟 钮利喜
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 环酰亚胺水解酶 半胱氨酸 反应性 功能
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 酶和蛋白质
• 页码范围: 776-782
• 分类号: Q936
• 语种: 中文

摘要

[目的]研究环酰亚胺水解酶(Imidase,CIH)中的两个半胱氨酸残基的反应性及功能.[方法]设计了3个半胱氨酸突变酶:CIH7,108、CIH7、CIH108.将天然酶以及突变酶基因分别与麦芽糖结合蛋白(MBP)基因在大肠杆菌(Escherichia coli)中进行融合表达,融合蛋白经纯化后得到了电泳纯的样品.使用5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)对天然酶CIH的巯基基团进行修饰,并分析了DTT对分子状态的影响.进一步研究了经H2O2处理后CIH及其突变酶的锌离子结合能力及分子状态.[结果]酶活测定表明CIH7.108和CIH7的活力基本丧失,而CIH108仍保持了72%的酶活性.CIH中的两个半胱氨酸残基以游离形式存在,不形成链内或链间二硫键.CIH与CIH108为四聚体结构且具有一定的锌离子结合能力,CIH7,108为多聚体,CIH7为单体及多体的混合物且都不具备锌离子结合能力,随着H2O2浓度的增加,CIH中的链内二硫键及CIH108中的链间二硫键逐渐增加.[结论]说明Cys7是结合锌离子和稳定CIH分子结构的必要残基.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钮利喜	山西大学生物技术研究所教育部化学生物学与分子工程重点实验室	16	60	4.0	6.0
2	石亚伟	山西大学生物技术研究所教育部化学生物学与分子工程重点实验室	33	84	5.0	7.0
3	刘晓琴	山西大学生物技术研究所教育部化学生物学与分子工程重点实验室	2	1	1.0	1.0