BPIV-3和BVDV双重RT-PCR快速检测方法的建立

• 作者: 刘晓乐 张敏敏 胡长敏 郭爱珍 陈焕春 陈颖钰
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 双重PCR 检测方法 牛副流感病毒3型 牛病毒性腹泻病毒
• 年，卷（期）: 2011,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1-5
• 分类号: S852.653
• 字数: 4403字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2011.11.001

摘要

参照GenBank中登录的牛副流感病毒3型(BPIV-3)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)全基因序列,分别针对BPIV3特异性NP蛋白保守基因和BVDV保守区段E2基因设计2对引物,经优化反应条件建立了快速鉴别BPIV-3和BVDV的双重RT-PCR诊断方法.最佳扩增条件为94℃30 s,56.2℃30 s,72℃1 min,循环30次；72℃延伸5 min,16℃10 min; BVDV引物浓度为1.0 μmol/L,BPIV-3引物浓度为0.5 μ.mol/L.采用该方法检测BPIV-3和BVDV参考病毒株,能同时扩增出预期为425 bp和294 bp大小的特异性片段,而扩增牛传染性鼻气管炎病毒、牛合胞体病毒、猪瘟病毒以及牛支原体、致病性大肠埃希茵、多杀性巴氏杆菌A型、化脓隐秘杆菌和鼠伤寒沙门茵等均呈阴性反应.对参考病毒株进行梯度稀释检测,结果证明该方法检测BPIV-3的灵敏度可达10-3 TCID50/0.1 mL,而BVDV的灵敏度达102 TCID50/0.1mL.