小鼠骨髓源性内皮祖细胞的培养和表面标志物鉴定

• 作者: 张健 李凤贺 李悦 李晰 杨栋 汪颖厚 王磊 辛世杰 马文锋
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 内皮祖细胞 小鼠 骨髓 细胞培养
• 年，卷（期）: 2011,（12）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 1063-1066
• 分类号: R254
• 字数: 3175字
• 语种: 中文
• DOI: 21-1227/R.20111226.1614.023

摘要

目的 建立一种从小鼠骨髓中分离、培养内皮祖细胞(EPC)的方法,并对EPC多种表面标志物进行鉴定.方法 密度梯度离心法获取小鼠骨髓源性单个核细胞,应用专门培养基EGM-2培养.观察不同时期细胞增殖情况；在培养7d后行DIL-AC-LDL和FITC-UEA-1双荧光染色鉴定及流式细胞检测；应用RT-PCR分析0,4,7d时CD31、CD34、CD45、CD117、CD133、FLK-1、VE-Cad等表面标志物的表达情况.结果 诱导培养的骨髓单个核细胞72 h后基本完成贴壁,8～9 d时贴壁70％～80％可进行传代,2～3周后呈典型的鹅卵石样外观.细胞培养7d后DIL-AC-LDL和FITC-UEA-1双染色阳性细胞比例为(90.16±6.77)％,流式细胞检测PE-Flk-1、APC-CD133、FITC-CD34均阳性概率为(1.73±0.27)％.RT-PCR结果显示随时间推移CD34、CD117、CD133的表达量逐渐下降,而CD31、FLK-1、VE-Cad等内皮系标志物的表达逐渐增加.结论 密度梯度离心法结合定向诱导培养可获得较多数量的EPC,以流式细胞检测技术为主,结合细胞形态学和功能学对EPC进行鉴定是一种较为理想的方法.