Dishevelled2siRNA载体的构建和有效干扰质粒的筛选

• 作者: 毛英杰 赵鹃 黄旭
• 来源期刊: 华西口腔医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Dishevelled 2 siRNA RAW264.7细胞 破骨细胞
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 专栏论著
• 页码范围: 529-533
• 分类号: R782.2
• 字数: 4475字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1182.2011.05.021

摘要

目的 构建和筛选特异性抑制Dishevelled 2 (Dvl2)表达的siRNA载体,为进一步研究Dvl2在破骨细胞分化及骨重建中的作用、筛选调节骨重建潜在靶点而奠定基础.方法 根据目的基因设计5个siRNA靶点,与pMAGic 4.0载体形成重组质粒,转化DH5α感受态细胞,含抗生素的LB琼脂平板上筛选转化子,菌落PCR鉴定阳性克隆,测序验证正确的转化子,质粒抽提,Lipofectamine 2000将质粒瞬时转染RAW264.7细胞,通过绿色荧光信号观察转染,实时定量RT-PCR检测Dvl2基因表达的变化.结果 菌落PCR和测序证实所构建的siRNA质粒目的基因大小、序列与预期相符,能有效抑制RAW264.7细胞Dvl2基因的表达,其中3号质粒抑制效率最高.结论 成功构建并筛选出特异性抑制Dvl2 mRNA表达的siRNA载体,可用于包装病毒颗粒和构建Dvl2表达抑制的稳定转染RAW264.7细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄旭	浙江大学医学院附属第一医院口腔科	22	144	7.0	11.0
2	赵鹃	浙江大学医学院附属口腔医院修复科	13	49	5.0	6.0
3	毛英杰	浙江大学医学院附属口腔医院修复科	13	82	5.0	9.0