ssp411基因siRNA表达载体的构建与有效干扰质粒的筛选

• 作者: 华敏敏 施惠娟 李润生 李玉华 欧伶
• 来源期刊: 实验动物与比较医学
• 学科: 生物学
• 关键词: ssp411 RNA干扰 短发夹RNA 实时定量PCR
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 74-80
• 页数: 7页
• 分类号: Q78
• 字数: 4190字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2009.02.002

摘要

目的 为探索精子细胞特异表达的新基因ssp411在受精及早胚发育中的功能,设计并构建了以ssp411基因为靶点的RNA干扰表达载体siRNA-ssp411s,筛选其中对ssp411基因有显著干扰作用的表达质粒.方法 根据已知的ssp411 mRNA序列,选择设计三条带发卡结构的核苷酸序列,克隆到含有U6启动子的载体pRNAT-U6.1中并测序分析.用脂质体转染的方法将干扰质粒与表达质粒ssp411-pDsRed共转染293T细胞,24h后,荧光倒置显微镜观察转染效率,并收集细胞,通过实时定量PCR方法检测不同干扰质粒对ssp411 mRNA的干扰效果.结果 3个ssp411的siRNA片断被成功克隆到pRNAT-U6.1质粒载体中,插入片段测序结果与设计的序列完全一致.实时定量PCR结果表明,针对ssp411基因蛋白编码区3-22序列构建的干扰质粒效果最好,干扰效率可达71%.结论 成功构建了能表达ssp411 shRNA(small hairpin RNA)的重组质粒,同时通过共转染技术,筛选到一个干扰效果达70%以上的干扰片断,为建立转基因RNA干扰小鼠模型,在体内研究ssp411基因及蛋白的生殖生物学功能打好基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	欧伶	华东理工大学生物工程学院	34	227	9.0	14.0
2	华敏敏	华东理工大学生物工程学院	2	14	1.0	2.0
3	施惠娟	国家人口和计划生育委员会计划生育药具重点实验室上海计划生育科学研究所	4	6	2.0	2.0
4	李玉华	国家人口和计划生育委员会计划生育药具重点实验室上海计划生育科学研究所	1	0	0.0	0.0
5	李润生	国家人口和计划生育委员会计划生育药具重点实验室上海计划生育科学研究所	1	0	0.0	0.0