山羊PHGPx基因干扰质粒构建及其抑制效应评价

• 作者: 任有蛇 岳文斌 张春香 施力光 王茜 荀文娟
• 来源期刊: 山西农业大学学报(自然科学版)
• 关键词: 山羊 PHGPx基因 干扰质粒 生精细胞 抑制效应
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 页码范围: 289-295
• 页数: 7页
• 分类号: Q945
• 语种: 中文

摘要

为了构建高效的靶向山羊PHGPx基因的干扰质粒,并在山羊共培养生精细胞中验证其抑制效应,利用Ambion在线软件设计4对针对山羊PHGPx有潜在干扰效果的siRNA,体外退火后形成具有发夹结构的shRNA,将其与线性化的pGPU6/GFP/Neo载体相连形成质粒,然后经Pst I和BamH I酶切和测序鉴定；利用脂质体将其转染到体外共培养生精细胞中,用RT-PCR和Western印迹方法检测其PHGPx基因的抑制效应.结果表明:经Pst I和BamH I酶切和测序确定了150、182、214和248共4种pGPU6/GFP/Neo-PHGPx-shRNA的阳性克隆质粒；Lipofectamine 2000TM脂质体瞬时转染的共培养生精细胞的Real-time PCR结果表明,pGPU6/GFP/Neo-PHGPx-150、214和248质粒能够显著降低共培养细胞PHGPx mRNA的表达,蛋白免疫印迹结果图像分析免疫条带的平均光密度结果表明,pGPU6/GFP/Neo-PHGPx-214质粒极显著降低了共培养生精细胞PHGPx蛋白表达(P＜0.01).pGPU6/GFP/Neo-PHGPx-shRNA质粒载体构建成功,pGPU6/GFP/Neo-PHGPx-214质粒瞬时转染共培养生精细胞后可以明显抑制PHGPx基因表达,可用于进一步PHGPx基因功能的研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	岳文斌	山西农业大学动物科技学院	221	1586	19.0	30.0
2	任有蛇	山西农业大学动物科技学院	150	714	13.0	18.0
3	荀文娟	山西农业大学动物科技学院	18	59	4.0	7.0
4	张春香	山西农业大学动物科技学院	137	599	13.0	16.0
5	施力光	中国热带农业学院热带牧草和畜禽研究所	54	174	7.0	10.0
6	王茜	山西农业大学动物科技学院	7	24	1.0	4.0