人NHE-1基因miRNA干扰载体构建、鉴定及干扰效应评价

• 作者: 方伯言 黄美风
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 钠氢交换蛋白-1 干扰载体 干扰效应
• 年，卷（期）: 2010,（18）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2721-2724,2728
• 分类号: R741.02
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-8982.2010.18.003

摘要

目的构建人钠氢交换蛋白-1（NHE-1）基因的miRNA特异性干扰表达载体并转染293细胞,筛选其有效性。方法设计4对miRNA oligo,依次通过退火、连接,构建含NHE-1前体miRNA的重组干扰质粒pcDNATM 6.2-GW/NHE-miR和阴性对照质粒pcDNATM 6.2-GW/neg-miR,并转染293细胞,经Re-al-Time PCR评价干扰效应,筛选出干扰效应最佳的靶序列。结果测序证实目的片段正确插入载体中,成功构建4个人NHE-1基因miRNA干扰载体;Real-Time PCR证实完成干扰效应评价,并根据NHE-1基因转录调控区及其蛋白分子结构功能区评价结果,得到NHE1-4是最佳干扰片段。结论成功构建针对人NHE-1基因的miRNA特异性有效干扰质粒,为后续NHE-1基因腺病毒miRNA表达载体的构建及其在调控APP裂解相关酶类的功能研究奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	方伯言	辽宁医学院附属第一医院神经内科	24	40	4.0	4.0
2	黄美风		2	5	1.0	2.0