甘蔗黄叶病毒外壳蛋白基因克隆及其实时荧光RT-PCR检测

• 作者: 徐景升 杨帆 王恒波 陈如凯 陈平华 高三基
• 来源期刊: 植物病理学报
• 学科: 农学
• 关键词: 甘蔗黄叶病毒 外壳蛋白 序列分析 实时荧光RT-PCR
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 细胞生物学、生理学、生物化学、分子生物学
• 页码范围: 262-269
• 分类号: S432.41|S435.661
• 字数: 4444字
• 语种: 中文

摘要

甘蔗黄叶病毒(Sugarcane yellow leaf virus,SCYLV)引起的甘蔗黄叶病是一种新的全球性病毒病害.本文以YLSCPF1和YLSCPR591为引物,采用RT-PCR方法克隆了甘蔗黄叶病毒福建分离物(CHN-FJ1)外壳蛋白(CP)基因,编码196个氨基酸.分析不同地理来源的SCYLV病毒分离物cp基因核苷酸及其推导编码的氨基酸序列,同源性达95%以上.根据cp基因的保守序列,设计1对特异性引物和TaqMan探针,建立了SCYLV的TaqMan实时荧光RT-PCR方法.结果表明,检测下限为初始质粒模板DNA1 000拷贝/μL(约3.61 fg/μL),比常规PCR方法的灵敏度提高100倍.检测甘蔗花叶病毒、宿根矮化病菌和黑穗病菌,没有典型的扩增曲线和无Ct值.应用实时荧光RT-PCR、常规RT-PCR和组织印迹免疫杂交(TBIA)对田间甘蔗叶片样品进行检测,阳性检出率分别为100%、61.5%和69.2%,表明该方法比常规RT-PCR和TBIA具有更高的灵敏度,适合于对SCYLV的检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王恒波	福建农林大学农业部甘蔗遗传改良重点开放实验室	13	64	6.0	7.0
2	陈如凯	福建农林大学农业部甘蔗遗传改良重点开放实验室	125	1780	20.0	34.0
3	陈平华	福建农林大学农业部甘蔗遗传改良重点开放实验室	25	201	9.0	11.0
4	高三基	福建农林大学农业部甘蔗遗传改良重点开放实验室	31	480	11.0	21.0
5	杨帆	福建农林大学农业部甘蔗遗传改良重点开放实验室	10	18	3.0	4.0
6	徐景升	福建农林大学农业部甘蔗遗传改良重点开放实验室	17	288	10.0	16.0