携带siANGPTL4重组腺病毒的构建及其对MG63增殖的抑制作用

• 作者: 李映良 毕杨 洪思琦 郭振华 陈镜宇
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 腺病毒 血管生成素样蛋白4 转染 骨肉瘤 红色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 28-32
• 分类号: R394-33|R73-354|R730.23
• 语种: 中文

摘要

目的 应用AdEasy腺病毒改良载体系统构建携带siANGPTL4基因的重组腺病毒,进一步研究ANGPTL4基因对骨肉瘤细胞株MG63增殖的影响.方法 将设计的siRNA靶点寡聚核苷酸克隆到pSES-HUS载体构建重组质粒pSES-siANGPTL4,在BJ5183大肠杆菌内与pAdEasy1骨架质粒完成同源重组;经脂质体介导转入HEK293细胞包装、扩增并经反复感染获得携带siANGPTL4基因的重组腺病毒Ad-siANGPTL4;有限稀释法检测病毒滴度;根据加入的重组腺病毒携带的基因不同将实验细胞分为阴性对照组、RFP组(加入Ad-RFP)、ANGPTL4组(加入Ad-ANGPTL4)及siANGPTL4组(加入Ad-siANGPTL4),利用腺病毒感染人骨肉瘤细胞株MG63,RT-PCR法检测细胞内ANGPTL4基因相对表达强度.结晶紫染色及细胞计数观察ANGPTL4基因对MG63细胞增殖的影响.结果 成功构建携带siANGPTL4基因的重组腺病毒Ad-siANGPTL4,病毒滴度达1.2×1011～2.6×1011efu/ml;阴性对照组、RFP组、ANGPTL4组及siANGPTL4组细胞ANGPTL4 基因表达的相对强度分别为(104.87±5.21)、(110.95±4.15)、(145.24±7.26)、(72.81±3.61);siANGPTL4组相对表达强度显著降低(P<0.05).结晶紫染色及细胞计数显示,ANGPTL4基因过度表达可促进MG63细胞增殖;该基因抑制后MG63细胞增殖明显减缓(P<0.05).结论成功构建了Ad-siANGPTL4重组腺病毒并感染MG63使其内源性表达的ANGPTL4基因沉默;该基因的表达沉默抑制MG63细胞体外增殖.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李映良	重庆医科大学儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室	57	270	8.0	13.0
2	陈镜宇	重庆医科大学儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室	15	123	5.0	11.0
3	毕杨	重庆医科大学儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室	24	63	5.0	7.0
4	郭振华	重庆医科大学儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室	15	58	4.0	7.0