乙型肝炎病毒核心抗原的原核表达及纯化

• 作者: 吴刚 崔文禹 徐静 李计来 王娟 许丽锋 赵莉
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎核心抗原,乙型 病毒样颗粒 基因优化 原核细胞 基因表达 纯化
• 年，卷（期）: 2011,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1121-1125
• 分类号: R373.2|Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 原核表达乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg),纯化HBcAg病毒样颗粒(Virus-like particle,VLP),并对其理化性质进行鉴定.方法 根据大肠杆菌密码子偏爱性对HBcAg基因进行密码子优化,全基因合成优化基因,克隆至载体pET-32a(+)中,构建原核表达质粒pET-HBcAg,转化大肠杆菌BL21( DE3),IPTG诱导表达.重组蛋白经盐析和层析纯化后,经SDS-PAGE、Western blot、电镜观察、等电点分析、高效液相色谱(HPLC)分析和N-末端氨基酸测序等进行鉴定.结果 重组表达质粒经酶切和测序鉴定证明构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约为21 000,为可溶性表达,表达量占菌体总蛋白的21.6％；纯化后其纯度可达99.4％,具有良好的反应原性,VLP形成良好,结构均一,等电点在pH6.0～6.9之间,HPLC分析形成T3和T4两种不同结构,N-未端序列正确,无氨基酸降解.结论 已成功构建了HBcAg原核表达质粒,并获得了高纯度的HBcAgVLP,为进一步研究HBcAg VLP的生物学特性奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	许丽锋		16	43	3.0	5.0
2	徐静		44	107	5.0	8.0
3	王娟		10	16	3.0	3.0
4	赵莉		5	7	2.0	2.0
5	吴刚		7	13	2.0	3.0
6	李计来		10	12	3.0	3.0
7	崔文禹		8	21	3.0	4.0