柑橘溃疡病菌单链二硫键稳定重组抗体的构建、表达和特性

• 作者: 于红 吴瑜佳 李蒙 殷幼平 王中康
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 柑橘溃疡病菌 基因改造 sc-dsFv重组抗体 复性 BIAcore分析 原核表达
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 所属期刊栏目: 研究资源
• 页码范围: 178-185
• 分类号: S6
• 字数: 6663字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2011.01.026

摘要

柑橘溃疡病(citrus bacterial canker disease,CBCD)是危害柑橘(Citrus redculata Blanco)的重要病害,为了给柑橘溃疡病的现场快速诊断提供一种稳定的重组抗体,构建一种快速检测技术,本研究以鼠源抗柑橘溃疡病菌((Xanthomonas axonopodis pv.citri,Xac)表面脂多糖的二硫键稳定性抗体dsFv为模板进行基因改造,利用重叠延伸PCR在其重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)之间引入一条人类抗体重链恒定区I(CHI)5'端12个氨基酸的序列作为连接肽,构建重组单链二硫键稳定抗体基因sc-ds Fv.将获得的基因连接pET24a(+)载体,转入大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3)得到工程菌,IPTG诱导表达.表达产物经体外复性并以Ni-NTA亲和层析对目标蛋白sc-dsFv进行纯化,利用斑点免疫杂交、ELISA和BIAcore检测抗体的活性、稳定性、特异性及亲和力.构建的抗体基因经测序结果表明,抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因之间成功引入目标连接肽序列,重组sc-dsFv蛋白实现了原核高效表达;通过体外复性和Ni-NTA柱纯化获得纯度高于90%的se-dsFv蛋白.特异性和亲和性测定结果表明,该重组抗体具有特异的抗原结合活性和良好的抗原亲和力,与本实验室保存的抗柑橘溃疡病菌表面脂多糖scFv及dsFv比较,产量有明显提高且稳定性也有所提高.这种具有特异抗原结合活性的稳定抗体sc-dsFv的获得为柑橘溃疡病的快速免疫诊断提供了高效优质重组抗体,并为病害治疗性抗体制备提供了有效的方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王中康	重庆大学生物工程学院重庆市基因功能与调控重点实验室	57	766	16.0	25.0
2	殷幼平	重庆大学生物工程学院重庆市基因功能与调控重点实验室	57	718	14.0	23.0
3	李蒙	重庆大学生物工程学院重庆市基因功能与调控重点实验室	2	5	2.0	2.0
4	于红	重庆大学生物工程学院重庆市基因功能与调控重点实验室	2	5	2.0	2.0
5	吴瑜佳	重庆大学生物工程学院重庆市基因功能与调控重点实验室	4	25	3.0	4.0