二硫键和Ca2+结合残基对重组酱油曲霉碱性蛋白酶的影响

• 作者: 余健 卫孟瑶 柯野 樊银凤 谢涛
• 来源期刊: 《福建农林大学学报（自然科学版）》
• 关键词: 酱油曲霉碱性蛋白酶 二硫键 Ca2+结合残基 定点突变 表达 热稳定性
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 食品科学
• 页码范围: 813-818
• 页数: 6页
• 分类号: TS202.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.13323/j.cnki.j.fafu(nat.sci.).2019.06.020

摘要

以PDB code:3f7o.1.A蛋白酶作为模板对酱油曲霉碱性蛋白酶(Alkaline protease,Ap)进行同源建模,对模拟的Ap结构分析可知,Ap中无二硫键,结合了1个Ca2+.分别对预测的Ap二硫键和Ca2+结合残基进行突变,获得增加二硫键的Y34C-R123C、L178C-T252C、Y34C-R123C/L178C-T252C和Ca2+结合位点的T179G、D200G、T179G-D200G共6个突变.分别将这些突变基因电转至毕赤酵母KM71中,获得重组菌株;对重组菌株诱导表达,分离纯化突变型Ap,并对其稳定性进行分析.结果表明,Y34C-R123C突变型、L178C-T252C突变型与野生型Ap的表达量差异不显著;在40℃以下,Y34C-R123C突变型比野生型Ap具有更强的热稳定性;T179、D200被突变为甘氨酸后,不利于Ap正确折叠,不能成功表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	柯野	韶关学院英东生命科学学院	45	331	8.0	17.0
2	谢涛	韶关学院英东生命科学学院	1	0	0.0	0.0
3	卫孟瑶	韶关学院英东生命科学学院	1	0	0.0	0.0
4	樊银凤	韶关学院英东生命科学学院	1	0	0.0	0.0
5	余健	韶关学院英东生命科学学院	1	0	0.0	0.0