鼠疫耶尔森氏菌Pla蛋白的分离纯化与质谱分析

• 作者: 唐雪 宋志忠 张建中 杜春红 王鹏 石丽媛 肖迪
• 来源期刊: 中国地方病防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 鼠疫耶尔森氏菌 纤溶酶原激活因子 提取 纯化 质谱
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 161-165
• 页数: 5页
• 分类号: R516.8
• 语种: 中文

摘要

目的 建立一种从鼠疫耶尔森氏菌疫苗株EV76中分离纯化纤维蛋白酶原激活因子(Pla)的方法.方法 采用超声破碎与硫酸铵盐析结合的方法初步提取Pla,经CHT陶瓷羟基磷灰石层析分离纯化,所获取的Pla进行质谱分析及Western blot实验.结果 菌悬液超声破碎后上清以0～10％饱和硫酸铵沉淀,获得含有相对分子质量(Mr)约为31 000、35 000、37 000的3条Pla蛋白带,约占蛋白总量33％；CHT柱层析后,3条带约占蛋白总量80％.经质谱分析,在Mr约为31 000、35 000的条带中含有Pla,Pla单克隆抗体能特异性地识别该蛋白.结论 采用超声破碎结合硫酸铵盐析的方法可从鼠疫菌中提取Pla,CHT柱层析可达到基本纯化,获得的样品经质谱分析和Western blot实验证实为Pla蛋白.