泥蚶金属硫蛋白的鉴定、原核重组表达及其组织细胞分布

• 作者: 何中央 刘玮 吴信忠 解家松 许婷
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 泥蚶 金属硫蛋白 原核表达 组织细胞分布
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 955-964
• 分类号: S917
• 字数: 7231字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1118.2011.00955

摘要

采用RT-PCR方法扩增、克隆和鉴定了泥蚶(Tegillarca granosa)的金属硫蛋白(Metallothionein,MT)基因(TgMT)的开放阅读框(ORF).基于金属硫蛋白氨基酸序列构建的系统进化树表明,泥蚶和魁蚶(Scapharca broughtonii)的亲缘关系最近.利用ORF序列,构建原核重组表达质粒.重组质粒经PCR、酶切鉴定及测序验证后转化大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3),经IPTG诱导,表达重组蛋白,重组蛋白的分子量约为28.3 kD.可溶性分析表明重组蛋白主要以可溶性形式存在.用His-tag柱亲和纯化重组蛋白,并利用重组蛋白制备了兔抗血清.Real-time PCR和Western blot实验表明,金属硫蛋白在泥蚶的各个组织中都有表达,并且在消化腺中的表达量最高.采用激光共聚焦显微镜,对泥蚶的消化腺进行免疫组化定位分析,发现泥蚶的MT主要存在于消化腺腺管上皮细胞的胞质中.泥蚶MT的克隆和表达研究为进一步研究该蛋白在环境监测中的作用、探讨细胞解毒的分子生物学机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何中央		56	690	15.0	22.0
2	吴信忠	浙江大学动物科学学院	34	363	11.0	18.0
3	刘玮	宁波大学生命科学与生物工程学院	3	17	2.0	3.0
4	许婷	浙江大学动物科学学院	12	142	7.0	11.0
5	解家松	浙江大学动物科学学院	1	10	1.0	1.0