石斑鱼神经坏死病毒RNA干扰的

• 作者: 喻达辉 曾令兵 柳明 潘俐玲 王晓宁 黄桂菊 龙华
• 来源期刊: 华南农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 石斑鱼 神经坏死病毒 衣壳蛋白基因 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 动物科学与兽医学
• 页码范围: 93-98
• 分类号: S917.4
• 字数: 4438字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-411X.2011.02.022

摘要

克隆了石斑鱼神经坏死病毒(Nervous necrosis virus,NNV)的衣壳蛋白(Major capsid protein,MCP)基因序列并构建了绿色荧光蛋白(EGFP)基因与MCP基因的融合真核表达载体pEGFP-MCP,设计了3对针对MCP基因序列的小片段干扰性RNA(Small interrering RNA,siRNA)序列(NNV-001、NNV-002、NNV-003),开展了转染方法、转染剂量与转染效果的研究,用脂质体转染法将pEGFP-MCP和不同剂量的siRNA共转染导入黑头呆鱼肌肉(FHM)细胞.结果表明,用无血清培养基转染、4～6 h后换液的转染方法,比不换液、只将转染混合物代替同体积培养基的转染方法效率高;当质粒的转染量为50、70、100和150ng时,100ng的转染量为最合适;在pEGFP-MCP与siRNA共转染组,3对siRNA序列都有干扰效果,均能干扰绿色荧光蛋白的表达,其中NNV-002效果最好.当siRNA终浓度为200 mol/L时,显示出了较好的沉默效果.