抑制HIF-1α表达的siRNA序列长效shRNA抑制载体的构建

• 作者: 孙蕾 康巧珍 张聚真 杨观瑞 汲振余 汲翔 程道博 赵立群 郭欢
• 来源期刊: 郑州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 缺氧诱导因子-1α 小干扰RNA 短发夹RNA Het-1A细胞
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 食管癌研究
• 页码范围: 173-176
• 分类号: R735.1
• 字数: 2220字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6825.2011.02.003

摘要

目的:设计特异抑制缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白诱导表达的小干扰RNA(siRNA)序列,并构建能长效抑制HIF-1α基因表达的HIF-1α的短发夹siRNA(shRNA)表达载体.方法:依据NCBI数据库获得HIF-1α mR-NA序列,利用Whitehouse、SiDirect和Rational siRNA Design软件及Blast设计和优化siRNA序列;将siRNA序列转换成编码shRNA的DNA序列后克隆入pENTR<'TM>/H1/TO载体,测序鉴定;将重组质粒pENTR<'TM>/H1/TOHIF-1α转染食管上皮细胞Het-1A(实验组),并设阴性对照(转染阴性对照序列)、空白对照组和诱导对照组.实验、阴性对照和诱导对照组细胞经CoCl<,2>化学诱导.Western blot法检测4组HIF-1α蛋白的表达.结果:以优化改造的含29核昔酸的干扰序列构建shRNA表达载体,经测序鉴定无误.4组细胞HIF-1α蛋白表达比较,差异有统计学意义(F=66.863,P<0.001).实验组Het-1A细胞HIF-1α蛋白表达较诱导对照和阴性对照组明显下降.结论:成功构建了HIF-1α shRNA表达载体.