pSIREN-HIF-1α/shRNA表达载体的构建与鉴定

• 作者: 任艳鑫 喻博 张书萍 张康 李晓江 赵留芳 隋军 马静
• 来源期刊: 昆明医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 鼻咽癌 质粒 HIF-1α 短发卡RNA
• 年，卷（期）: 2013,（10）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 58-61,72
• 页数: 5页
• 分类号: R739.6
• 字数: 2721字
• 语种: 中文

摘要

目的：构建pSIREN-HIF-1α/shRNA重组质粒并测序鉴定，为下一步探索鼻咽癌基因治疗的RNA干扰（RNA interference， RNAi）途径奠定基础。方法根据基因库 HIF-1αcDNA 序列（NM_001530/NM_181054）以及Reynolds设计原则，设计并合成两端有酶切位点的60个碱基的寡核苷酸链，退火成互补双链后将退火产物与RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-ZsGreen载体链接后，热转化至大肠杆菌JM109菌株中，提取质粒进行1%琼脂糖凝胶电泳鉴定，测序分析。结果 PCR扩增片段出现约470 bp大小的目的基因条带，与预期结果相符；凝胶电泳证实重组载体构建成功，插入片段测序结果与合成的寡核苷酸序列一致。结论成功构建重组质粒pSIREN-HIF-1α/shRNA，为下一步用脂质体包装并转染鼻咽癌细胞的研究奠定基础。